Fludarabine induces apoptosis in chronic lymphocytic leukemia - the role of P53, Bcl-2, Bax, Mcl-1, and Bag-1 proteins

The expression of P53, Bcl-2, Bax, Bag-1, and Mcl-1 proteins in CD5/CD20-positive B-chronic lymphocytic leukemia (B-CLL) cells from 30 typical CLL patients was evaluated before and after 48 h of incubation with 10-6 M fludarabine using multiparametric flow cytometric analysis. Protein expression was correlated with annexin V expression, Rai modified clinical staging, lymphocyte doubling time, and previous treatment. Our main goal was to determine the predictive value of these proteins in CLL cells in terms of disease evolution. Bcl-2 expression decreased from a median fluorescence index (MFI) of 331.71 ± 42.2 to 245.81 ± 52.2 (P < 0.001) after fludarabine treatment, but there was no difference between viable cells (331.57 ± 44.6 MFI) and apoptotic cells (331.71 ± 42.2 MFI) before incubation (P = 0.859). Bax expression was higher in viable cells (156.24 ± 32.2 MFI) than in apoptotic cells (133.56 ± 35.7 MFI) before incubation, probably reflecting defective apoptosis in CLL (P = 0.001). Mcl-1 expression was increased in fludarabine-resistant cells and seemed to be a remarkable protein for the inhibition of the apoptotic process in CLL (from 233.59 ± 29.8 to 252.04 ± 35.5; P = 0.033). After fludarabine treatment, Bag-1 expression was increased in fludarabine-resistant cells (from 425.55 ± 39.3 to 447.49 ± 34.5 MFI, P = 0.012), and interestingly, this higher expression occurred in patients who had a short lymphocyte doubling time (P = 0.022). Therefore, we could assume that Bag-1 expression in such situation might identify CLL patients who will need treatment earlier.

Estudo da expressäo de proteínas pró-apoptóticas e anti-apoptóticas antes e após cultura com fludarabina em células de leucemia linfocítica crônica / Expression od apoptosis-regulating proteins before and after cell culture with fludarabine in chronic lymphocytic leukemia

A leucemia linfóide crônica (LLC), é neoplasia clonal de células B, caracteristicamente de evoluçao insidiosa, onde o acúmulo de linfócitos ocorre nao pelo índice de proliferaçao acentuado, mas pela inibiçao da apoptose. Objetivos: Averiguar as proteínas determinantes da apoptose: p53; bcl-2; bax; bag-1 e mcl-1 em linfócitos de portadores de LLC In natura", e após incubaçao com fludarabina e correlacionar a expressao destas proteínas com o grau de apoptose; com o estadiamento clínico de Rai modificado, o tempo de duplicaçao linfocitária (TDL) e a presença ou ausência de tratamento prévio. Métodos: Antes e após incubaçao com fludarabina por 48 horas foram determinadas por citometria de fluxo, as expressoes das proteínas p53, bcl-2, bax, bag-1, mcl-1 e anexina em células linfomononucleares separadas por gradiente de densidade. As subpopulaçoes viável e apoptótica foram identificadas à citometria através do tamanho, complexidade e co-expressao de CD5 e CD20. O grau de apoptose nas 2 subpopulaçoes foi confirmado pela expressao da anexina. Foi feita análise de variância da expressao das proteínas entre o sistema de estadiamento de Rai modificado, o tempo de duplicaçao linfocitária e a presença ou ausência de tratamento prévio nas 2 subpopulaçoes. Foi feita análise de correlaçao entre as expressoes das proteínas e a expressao da anexina. Foram utilizados os testes de Mauchly, a "ANOVA one way" e o coeficiente de Pearson para as análises estatísticas. Resultados e Conclusoes: A divisao da populaçao linfocitária em subpopulaçoes viável e apoptótica à citometria de fluxo, forneceu subsídios importantes no estudo do comportamento das proteínas, tais como: 1) A proteína p53 foi regulada positivamente após exposiçao à fludarabina; 2) A proteína bax foi importante indutora de apoptose na subpopulaçao responsiva à fludarabina; 3) A proteína bcl-2 apresentou açao anti-apoptótica na LLC, mas o índice bcl/bax refletiu melhor o comportamento celular na apoptose, por considerar também a influência da bax; 4) A proteína mcl-1 apresentou-se aumentada entre as células resistentes à incubaçao com fludarabina e pode ser uma das responsáveis pela inibiçao da apoptose na LLC; 5) A proteína bag-1 apresentou alta expressao na subpopulaçao de células viáveis na LLC, e foi a que mais se relacionou com a persistência da viabilidade celular após incubaçao com fludarabina;...(au)

Diffuse small lymphoplasmacytic lymphoma of the Gl tract associated with massive intestinal amyloidosis

Se describe el caso de un hombre de 80 años de edad que desarrolló un linfoma de linfocitos pequelos con diferenciación plasmocitoide que afectó al tubo digestivo en toda su extensión. El linfoma estuvo asociado a depósito de amiloide, presumiblemente producido por los linfocitos neoplásicos. Los síntomas sobresalientes fueron astenia, fiebre, acentuada pérdida de peso, diarrea y melena. En el estudio posmórtem se encontró, además, infiltración linfomatosa en la vesícula biliar, en ganglios linfáticos mesentéricos y en testículos. El presente caso es excepcional, en vista de la infiltración difusa y generalizada por el linfoma en el tubo digestivo y su asociación con amiloidosis masiva, que no han sido previamente documentados en la literatura disponible.